LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA : ISOLASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI ATAU PIPERIS ALBI

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

PERCOBAAN I

ISOLASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI ATAU PIPERIS ALBI

Oleh :

Kelompok 1 :

1.      Abdurrahman Al Asy’ari (M3514001)

2.      Adilla Nurmita                 (M3514002)

3.      Agustina Nur Rohmah     (M3514003)

4.      Amalian Dian K               (M3514005)

5.      Ani Nur Hayati                (M3514007)

6.      Dewi Yulinawati              (M3514012)

7.      Dian Islami M                  (M3514013)

8.      Dina Istiana                      (M3514014)

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2015

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

PERCOBAAN I

ISOLASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI

A.    TUJUAN

·         Dapat memahami prinsip isolasi piperin dari fructus piperis nigri

·         Dapat melakukan isolasi piperin dari fructus piperis nigri

·         Dapat melakukan analisis kualitatif dengan metode KLT

B.     DASAR TEORI

Piperin termasuk golongan alkaloid yang merupakan senyawa amida basa lemah yang dapat membentuk garam dengan asam mineral kuat. Khasiat dari buah lada yaitu dapat mengobati kaki bengkak pada ibu hamil, kolera, nyeri haid, rematik, salesma, dan impoten (Septiatin,2001).

Teknik ekstraksi sangat berguna untuk memisahkan secara cepat dan bersih baik untuk zat organik maupun zat anorganik. Cara ini dapat digunakan untuk analisis mikro dan makro. Secara umum, ekstraksi adalah proses penarikan suatu zat terlarut dari larutannya di dalam air oleh suatu pelarut lain yang tidak dapat bercampur dengan air (Purwani, et al., 2008).

Metode yang digunakan untuk mengisolasi piperin dari lada hitam adalah ekstraksi soxhlet yang merupakan pemisahan satu atau beberapa bahan dari suatu padatan dengan menggunakan bantuan pelarut. Pemisahan terjadi atas dasar kemampuan larut yang berbeda dari komponen-komponen dalam campuran/pemilihan jenis pelarut ini didasarkan atas beberapa faktor, yaitu selektivitas, kelarutan, kemampuan tidak saling campur, reaktivitas, titik didih, dan kriteria lainnya (Bernasconi,1995).

KLT dapat digunakan untuk memisahkan berbagai senyawa seperti ion-ion anorganik kompleks, senyawa-senyawa organik dengan anorganik, dan senyawa organik baik yang terdapat di alam dan senyawa organik sintesis. Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis dibandingkan dengan kromatografi kertas ialah karena dapat dihasilkannya pemisahan yang lebih sempurna, kepekaan yang lebih tinggi dan dapat dilaksanakan dengan lebih cepat.(Voight, 1995).

Empat macam absorben yang umum dipakai ialah silika gel, alumina, kieselguhr, dan selulosa. Sempel yang merupakan campuran senyawa yang akan dipisahkan, dilarutkan dalam zat pelarut yang mudah menguap, misalnya kloroform atau zat pelarut lain yang serupa, yang mempunyai titik didih antara 50-100 C. Pemilihan sistem pelarut atas dasar like dissolve like berarti untuk memisahkan sampel yang bersifat non polar digunakan sistem pelarut yang bersifat non polar juga (Adnan, 1997).

Kriatalisasi langsung merupakan prosedur paling sederhana, tetapi jarang memberikan hasil yang memuaskan untuk pemisahan alkaloid murni, kecuali apabila satu alkaloid yang terdapat dalam bahan tidak larut. Beberapa kombinasi pelarut yang sering digunakan untuk kristalisasi alkaloid meliputi metanol, etanol berair, metanol-kloroform, metanol-eter, metanol-aseton, dan etanol-aseton (Sastrohamidjojo,1996).

  CARA KERJA

     D.    ALAT DAN BAHAN

·      Alat yang digunakan meliputi :

1.        Perangkat penyari soxhlet (volume 100 ml)           (1 set)

2.        Heating mantle                                                       (1 buah)

3.        Batang pengaduk                                                   (1 buah)

4.        Cawan porselen                                                      (2 buah)

5.        Corong                                                                    (1 buah)

6.        Perangkat KLT                                                       (1 set)

7.        Gelas ukur                                                              (1 buah)

8.        Penangas air                                                            (1 buah)

9.        Mortir dan stamfer                                                             (1 buah)

10.    Gelas beker                                                             (2 buah)

11.    Timbangan                                                              (1 buah)

                                          

·      Bahan yang digunakan meliputi :

1.        Piperis nigri                                                             (30 gram)

2.        Etanol 96%                                                             (150 ml)

3.        Air                                                                          (secukupnya)

4.        Vaselin                                                                    (secukupnya)

5.        KOH etanolik 10%                                                 (10 ml)

6.        Silica gel GF 254                                                    (1 buah)

7.        Diklormetan                                                            (7,5 ml)

8.        Etil asetat                                                                (2,5 ml)

9.        Anisaldehid- Asam sulfat                                       (secukupnya)

E. HASIL DAN PEMBAHASAN

·         Hasil Percobaan

Pada proses isolasi Piperin dari fructus Piperis nigri ini diperoleh 8 kali sirkulasi dengan data sebagai berikut :

Volume piperin yang diperoleh dari hasil isolasi         : 125 ml

Volume awal sebelum diuapkan                                 : 122 ml

Bobot setelah diuapkan                                               : 1,5 gram

Hasil KLT

            Jarak noda       : 3,4 cm

            Jarak pelarut    : 7 cm

·         Pembahasan

Praktikum kali ini adalah praktikum Isolasi Piperin dari Fructus Piperis Nigri. Pada praktikum kali ini bertujuan untuk mengisolasi piperin dari Piperis Nigri, menganalisa secara kualitatif hasil isolasi dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT), dan melakukan isolasi dengan metode sokhletasi.

Ada beberapa metode untuk mengisolasi suatu bahan atau sampel, namun pada parktikum kali ini isolasi piperin menggunakan metode sokhletasi.  Metode sokhletasi adalah salah satu metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus soxklet sehingga terjadi ekstraksi konstan dengan adanya pendingin balik. Digunakan metode sokhletasi dikarenakan pelarut yang digunakan lebih sedikit dan larutan sari yang dialirkan melalui pipa sifon tetapi tinggal dalam labu, sehingga pelarut yang digunakan untuk mengekstrak sampel selalu baru dan meningkatkan laju ekstraksi, waktu yang digunakan pun lebih cepat. Namun, metode sokhletasi juga memiliki kekurangan yaitu pelarut yang digunakan harus mudah menguap dan tidak cocok digunakan untuk senyawa yang tidak tahan pemanasan.

Prinsip dari isolasi dengan metode sokhletasi adalah piperin disari dari buah piper dengan menggunakan etanol 96%, kemudian dipisahkan dari senyawa resin dengan penambahan KOH-etanol 10% b/v. Kristalisasi dilakukan dengan menggunakan etanol.

Piperin merupakan senyawa amida basa lemah yang dapa tmembentuk garam dengan asam mineral kuat. Apabila dihidrolisis dengan KOH-etanolik akan menghasilkan kalium piperinat dan piperin.

Proses isolasi ini dilakukan dengan cara menimbang 30 gram serbuk mrica dan dibungkus dengan menggunakan kertas saring yang ditali dengan menggunakan tali kenur pada bagian ujung-ujungnya, sehingga berbentuk seperti permen. Hal ini dilakukan agar serbuk merica mudah diambil saat proses isolasi selesai dan sampel tidak bercampur langsung dengan pelarut yang digunakan. Digunakan kertas saring dikarenakan kertas saring mempunyai dinding yang tipis dan berpori yang dapat mempermudah pelarut untuk menyerap piperin yang terkandung didalam sampel. Kemudian serbuk merica yang sudah ditali dimasukkan kedalam alat penyari sokhletasi yang disebut pipa timbel dan ditambahkan etanol 96% sebanyak150  ml atausampai 2 kali sirkulasi. Pada labu alas bulat dimasukkan 3 buah batu didih yang tujuannya agar panas didalam labu alas bulat bisa merata dan stabil, serta tidak menyebabkan labu alas bulat pecah saat pelarut mendidih. Labu alas bulat diletakkan di atas heating mantle namun jangan terlalu dekat, agar saat pelarut mendidih dan suhunya panas tidak menyebabkan labu alas bulat gosong. Kemudian alat dirangkai, bagian atas alat soxhlet disambungkan dengan selang untuk air keluar sedangkan bagian bawah alatsoxhlet dipasangkan selang yang dihubungkan dengan water pump untuk air masuk. Setelah semua alat dirangkai, water pump dan heating mantle dihubungkan ke arus listrik untuk memulai proses isolasi.

Proses penyarian dilakukan sebanyak 8 kali sirkulasi. Yang dimaksud dengan 1 kali sirkulasi adalah saat dimana pelarut naik dan kemudian kembali kebawah. Semakin lama waktu penyarian maka sirkulasi yang terjadi akan semakin cepat. Hal ini dikarekan pelarut sudah mulai panas sehingga lebih mudah menguap dan naik keatas. Dari isolasi ini diperoleh sari sebanyak 125 ml dan diambil 3 ml untuk dimasukkan ke dalam flacon. Sisa sari tersebut kemudian diuapkan.

Sisa sari yang diperoleh dimasukkan ke dalam cawan porselin kemuadian diuapkan di atas waterbath. Untuk menguapkan sari sampai diperoleh ekstrak kental  dibutuhkan waktu sangat lama, sehingga penguapan dilakukan pada hari lain. Ekstrak kental yang diperoleh ditambahkan dengan KOH-etanolik sebanyak 10 ml. Penambahan KOH-etanolik tidak boleh berlebihan dan harus dalam kondisi dingin karena piperin bila dihidrolisis dengan KOH-etanolik akan menghasilkan kalium piperinat dan piperin. Kemudian, ekstrak tersebut diaduk dan di diamkan sampai terbentuk endapan. Setelah terbentuk endapan, disaring dengan menggunakan kertas saring dan sari jernih yang diperoleh didinginkan pada lemari es.Pada saat sari jernih tersebut didinginkan pada lemaries, akan membentuk kristal. Kristal yang dihasilkan seberat 1,5 gram, sehingga rendemen hasilnya adalah 5%. Rendemen inidiperoleh dari bobot akhir dibagi dengan bobot awal dan dikalikan 100%. Pengamatan organoleptik terhadap kristal yang didapat adalah kristal berbau menyengat khas piperin dengan warna coklat kekuningan.

Metode pemisahan yang terakhir adalah Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Kromatografi lapis tipis merupakan teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam media berupa lempengan kromatografi. Pada KLT, komponen –  komponen dari suatu senyawa akan dipisahkan antar dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Fase diam akan menahan komponen campuran senyawa sedangkan fase geraknya akan melarutkan zat dalam komponen. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal, sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat.

Ada beberapa tahap yang dilakukanpada proses KLT yaitu penyiapan plat, pemilihan fase gerak, fase diam, serta pengamatan lokasi bercak pada kromatogram, deteksi dan identifikasi. Dalam praktikum KLT ini fase gerak yang digunakan adalah pelarut campuran dari diklormetan : etilasetat (75:25v/v). Dalam praktikum ini fase geraknya dibuat setengah dari jumlah total. Selanjutnya adalah preparasi fase diamnya yaitu berupa silica Gel GF 254, dilakukan dengan memotong plat dengan ukuran 5 x 10 cm. Pemotongan dilakukan menggunakan cutter supaya plat tidak rusak dan garis potongan tepi plat lebih akurat dan tidak mengganggu proses elusi.

Proses selanjutnya plat diberikan tanda batas atas dan tanda batas  bawah masing-masing 1cm,sebagai batas tempat penotolan sampel yaitu pada tanda batas bawah dansebagai penandaakhir proses pengelusian yaitu tanda batas atas. Jarak antarfraksi yaitu 1,5 cm dan jarak tepi dari fraksi yaitu 1 cm. Setelah itu fase gerak dijenuhkan, penjenuhan dilakukan supaya tekanan uap eluen dalam chamber dapat merata sehingga pengelusian dapat seragam kecepatannya dan penjenuhan dilakukan untuk mengoptimalkan proses pengembangan fase gerak. Sambil menunggu chamber jenuh, kita melakukan penotolan sampel pada plat KLT. Sampel ditotolkan dengan menggunakan pipa kapiler dan dilakukan sekali penotolan.

Plat yang sudah di totol dengan sampel tadi dimasukkan ke dalam chamber yang selesai dijenuhkan. Pengembangan dilakukan dengan memasukkan plat KLT yang telah ditotolkan ke dalam chamber. Plat selanjutnya di elusi sampai tanda batas atas pengembangan yang telah dibuat tadi.Cara pengembangan yang digunakan pada praktikum ini adalah ascending (menaik), yaitu pengembangan berdasarkan pada daya kapilernya.Tepi bagian bawah plat yang telah ditotoli sampel dimasukkan dan dicelupkan ke dalam fase gerak kurang lebih 0,5-1 cm. Dimana tinggi fase gerak dalam chamber harus dibawah plat yang berisi totolan sampel dan volume fase gerak dibuat sedikit mungkin tapitetap dapat mengelusi lempeng sampai pada batas jarak pengembangan. Hal tersebut bertujuan supaya tidak terjadi kontaminasi selama proses elusi berlangsung dan sampel tidak terendam yang kemudian bias merembet apabila tinggi fase gerak lebih tinggi dari sampel. Setelah proses elusi selesai, lalu plat dikeluarkan dari dalam chamber dan diangin- anginkan selama 10 menit. Setelah itu spot yang berjalanta dilihat di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm. Kemudian bercak atau elusi yang terbentuk di semprot dengan pereaksi semprotnya ,hal ini dilakukan dengan tujuan untuk memperjelas atau mempertegas adanya kandungan senyawa kimia dalam ekstrak.

Berdasarkan hasil yang telah diperoleh dari pengamatan, ketika dilihat di bawah sinar UV254 dan 366 nm didapatkan jarak noda 3,4 cm dan jarak pelarutnya 7 cm dengan harga Rf 0,49. Harga rf yang diperoleh hamper mendekati harga rf standart yaitu 0,5.Jadi, dapat disimpulkan bahwa spot yang dihasilkan pada identifikasi KLT itu adalah senyawa piperin.

F.      Kesimpulan

- Prinsip dari isolasi dengan metode sokhletasi adalah piperin disari dari buah piper dengan menggunakan etanol 96%, kemudian dipisahkan dari senyawa resin dengan penambahan KOH-etanol 10% b/v

- 1 kali sirkulasi adalah saat dimana pelarut naik dan kemudian kembali kebawah

- Piperin bila dihidrolisis dengan KOH-etanolik akan menghasilkan kalium piperinat dan piperin.

- Kromatografi lapis tipis merupakan teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam media berupa lempengan kromatografi

-  Harga Rf yang diperoleh 0,49. Harga rf tersebut hampir mendekati harga rf standart yaitu 0,5. Sehingga spot yang dihasilkan pada identifikasi KLT tersebut adalah senyawa piperin

G.  Daftar Pustaka

Adnan, Muhammad. 1997. Teknik Kromatografi. Andi offset: Yogyakarta.

Bernasconi. 1995. Teknik Kimia II. Pradya Paramitha: Jakarta.

Purwani, et al, 2007. Ekstraksi Neodenium memakai Asam 01-2 etil heksil fosfat. Vol 1 (1):3

Sastrohamidjojo, hardjono. 1996. Sumber Bahan Alam. UGM Press: Yogyakarta.

Septiatin, Eatin. 2008. Apotek Hidup dari Rempah-rempah. Tanaman Hias, dan Tanaman Liar, CV. YRAMA WIDYA: Bandung.

Voight, R. 1995. Buku Pelajaran teknologi Farmasi Edisi V. UGM Press: Yogyakarta.