LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA : ISOLASI MINYAK ATSIRI DARI CENGKEH

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

PERCOBAAN 2

ISOLASI MINYAK ATSIRI DARI CENGKEH

 

                                             Kelompok 1

Abdurrahman Al-asy’ary        (M3514001)

Adilla Nurmitta                       (M3514002)

Agustina Nur Rohmah            (M3514003)

Amalia Dian K                        (M3514005)

Ani Nurhayati                         (M3514007)

Dewi Yulinawati                     (M3514012)

Dian Islami Maharani              (M3514013)

Dina Istiana                             (M3514014)

LABORATORIUM FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

PERCOBAAN II

ISOLASI MINYAK ATSIRI DARI CENGKEH

A.    Tujuan Percobaan

Mampu membuat minyak atsiri dengan cara penyulingan dan ekstraksi dari cengkeh.

Mampu melakukan analisa kualitatif dengan mnggunakan KLT

B.     Dasar Teori

Menurut  Ketaren  (1987)  metode  destilasi  minyak  atsiri salah satunya adalah destilasi Stahl, metode  ini  pada  prinsipnya  sama  dengan  destilasi  dengan  air  dan  uap kecuali air tidak diisikan dalam labu. Uap yang digunakan uap jenuh atau kelewat panas  pada  tekanan  lebih  dari  pada  1  atmosfir.  Uap  dialihkan  melalui  pipa  uap berlingkar  yang  berpori  yang  terletak  dibawah  bahan  dan  uap  bergerak  ke  atas melalui bahan yang terletak di atas saringan.

Peralatan  pada  metode  destilasi  dengan  air  (hidrodestilasi)  pada  umumnya terdiri  dari  3  bagian  utama.  Tiga  bagian  utama  tersebut  adalah  alat penyulingan, pendingin dan penampung kondensat. Alat penyulingan berfungsi sebagai tempat bahan tanaman yang akan diproses. Dalam alat ini terdapat air yang berhubungan langsung  dengan  bahan  tanaman  dan  menguapkan  minyak  atsiri  yang dikandungnya. Pendingin berfungsi mengubah uap uap air yang mengandung uap minyak atsiri menjadi cairan. Penampung kondensat berfungsi untuk memisahkan minyak  atsiri  dari  air  yang  terkondensasi  secara  sempurna.  Kondensat  mengalir dari  pendingin  ke  penampung  kondensat  dan  akan  terlihat  minyak  atsiri  yang dihasilkan  akan  terpisah  dari  air  dengan  sendirinya,  karena  berat  jenis  minyak atsiri lebih ringan dari pada air (Sastrohamidjojo, 2004).

Prinsip kerja destilasi stahl sama dengan destilasi dengan air (hidrodestilasi). Namun  destilasi  stahl  memiliki  beberapa  kelebihan.  Kelebihan  penggunaan destilasi stahl antara lain: 

a.       Minyak  atsiri  yang dihasilkan tidak berhubungan  langsung dengan udara luar sehingga tidak mudah menguap.

b.      Volume  minyak  atsiri  yang  dihasilkan  dapat  langsung  diketahui  jumlahnya karena alatnya dilengkapi dengan skala.

Kromatografi  adalah  salah  satu  metode  pemisahan  komponen  dalam  suatu sampel  dimana  komponen  tersebut  didistribusikan  di  antara  dua  fasa  yaitu  fasa gerak dan fasa diam.  Fasa gerak adalah fasa yang membawa cuplikan, sedangkan fasa  diam  adalah  fasa  yang  menahan  cuplikan  secara  efektif  (Sastrohamidjojo,1991). 

Ditinjau  secara  fisik,  kromatografi  lapis  tipis  merupakan  salah  satu  jenis kromatografi planar. KLT memiliki banyak kesamaan dengan kromatografi kertas dalam penotolan sampel, pengembangan kromatogram dan cara deteksinya, tetapi proses pemisahan  yang terjadi pada KLT dan kromatografi kertas berbeda.  Pada KLT  pemisahan  yang  terjadi  secara  adsorbsi,  sedangkan  dalam  kromatografi kertas proses pemisahannya terjadi secara partisi.

Fase  diamnya  berupa  padatan  penyerap  yang  dihasilkan  pada  sebuah  plat datar dari gelas, plastik atau alumunium sehingga membentuk lapisan tipis dengan ketebalan tertentu.  Fase diam atau penyerap yang bisa digunakan sebagai pelapis plat  adalah  silika  gel  (SiO2),  selulosa,  alumina  (Al2O3)  dan  kieselgur  (tanah diatome).   Kebanyakan  penyerap  yang  digunakan  adalah  silika  gel,  dimana  telah tersedia plat yang siap pakai (Padmawinata, 1991).

Pelarut  sebagai  fasa  gerak  atau  eluen  merupakan  faktor  yang  menentukan gerakan  komponen-komponen  dalam  campuran.   Pemilihan  pelarut  tergantung pada sifat kelarutan komponen tersebut terhadap  pelarut  yang digunakan.  Trappe dalam Sastrohamidjojo mengatakan bahwa kekuatan dari elusi deret-deret pelarut untuk  senyawa-senyawa  dalam  KLT  dengan  menggunakan  silika  gel  akan  turun dengan urutan sebagai berikut : air murni > metanol > etanol > propanol > aseton >  etil  asetat  >  kloroform  >  metil  klorida  >  benzena  >  toluena  >  trikloroetilen >tetraklorida  >  sikloheksana  >  heksana.  Fasa  gerak  yang  bersifat  lebih  polar digunakan  untuk  mengelusi  senyawa-senyawa  yang  adsorbsinya  kuat,  sedangkan fasa  gerak  yang  kurang  polar  digunakan  untuk  mengelusi  senyawa  yang adsorbsinya lemah (Sastrohamidjojo, 1991). Analisis  suatu  senyawa  dalam  KLT  biasanya  dilakukan  dengan dibandingkan terhadap senyawa standarnya.  Pengamatan yang lazim berdasarkan pada  kedudukan  dari  noda  relatif  terhadap  batas  pelarut  yang  dikenal  sebagai harga Rf (Retardation factor) yang didefinisikan sebagai berikut :

RF : Jarak komponen yang bergerak/ Jarak pelarut yang bergerak

Identifikasi  awal  senyawa  pada  kromatogram  dapat  dilakukan  dengan melihat  warna  noda  dibawah  sinar  UV  atau  dengan  menyemprotkan  pereaksi warna sesuai dengan jenis atau kelas senyawa yang dianalisis.

Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  gerakan  noda  dalam  kromatografi  lapis tipis  yang  mempengaruhi   harga  Rf  adalah  sebagai  berikut  (Sastrohamidjojo, 1991) :

a.       Struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan.

b.      Sifat  dari  penyerap  dan  derajat  aktivitasnya.  Aktivitas  dicapai  dengan pemanasan  dalam  oven.  Perbedaan  penyerapan  akan  memberikan perbedaan  yang  besar  terhadap  harga-harga  Rf  meskipun menggunakan pelarut yang sama.

c.       Tebal  dan  kerataan  lapisan  penyerap.  Ketidakrataan  akan menyebabkan aliran pelarut menjadi tidak rata dalam daerah yang kecil dari plat.

d.      Pelarut dan derajat kemurnian fasa gerak.

e.       Derajat kejenuhan dari uap dalam pengembang.

f.       Jumlah  cuplikan  yang  digunakan.  Penetesan  cuplikan  dalam  jumlah yang  berlebihan  memberikan  tendensi  penyebaran  noda-noda  dengan kemungkinan terbentuk ekor dan efek tak kesetimbangan.

g.      Pemisahan  sebaiknya  dilakukan  pada  suhu  tetap  untuk  mencegah perubahan-perubahan  komposisi  pelarut  yang  disebabkan  penguapan dan perubahan fasa.

h.      Kesetimbangan dalam lapisan tipis dimana bejana harus jenuh dengan uap pelarut.

C.    ALAT DAN BAHAN

Alat

a.       Seperangkat alat destilasi stahl           1 buah

b.      Gelas kimia                                         2 buah

c.       Gelas ukur                                           1 buah

d.      Pipet                                                     1 buah

e.      Ember                                                   1 buah

f.        Klem                                                    2 buah

g.       Statif                                                    2 buah

h.      Erlenmeyer                                           1 buah

i.         Timbangan                                           1 buah

j.        Aluminium foil                                     secukupnya

k.       Selang                                                    2 buah

l.         Heating manthel                                    1 buah

m.    Serbet                                                     1 buah

n.      Tisu                                                        secukupnya

o.      Pompa                                                    1 buah

Bahan

a.       Cengkeh                                                  50 gram

b.      Aquadest                                                  400 ml

c.       Air                                                            secukupnya

d.      N-heksan                                                  secukupnya

e.      Kloroform                                                 secukupnya

f.        Anisaldehid-asam sulfat                           secukupnya

g.       Silika gel                                                   1 buah

h.      Vaselin                                                      secukupnya

 D.    CARA KERJA

Penyarian minyak atsiri

 Uji KLT

   

    E.     HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil

1.                   Minyak atsiri   = 1 ml

2.                   Nilai Rf           =  0,562

Pembahasan

Pada percobaan isolasi minyak atsiri dari cengkeh ini dilakukan dengan metode destilasi stahl.. Percobaan ini dilakukan dengan tujuan mempelajari teknik pemisahan minyak atsiri cengkeh dengan cara penyulingan atau destilasi dan mendeteksi keberadaan senyawa eugenol dalam minyak cengkeh yang diperoleh dengan metode KLT.

            Pada isolasi minyak atsiri cengkeh ini dilakukan dengan metode destilasi stahl dengan prinsip berdasarkan perbedaan titik didih suatu zat. Komponen dengan titik didih yang lebih rendah akan menguap terlebih dahulu, sedangkan yang mempuyai titik didih lebih tinggi akan tertampung di labu distilasi. Saat pemanasan uap yang dihasilkan akan mengalir pada pipa kondensor untuk didinginkan kembali, sehingga uap air akan diubah kembali menjadi cair.

            Keuntungan dari destilasi stahl adalah :

1.      Alat sederhana dan mudah di peroleh.

2.      Mudah dilakukan.

3.      Kualitas minyak atsiri yang dihasilkan baik, asal di perhatikan suhunya jangan terlalu tinggi.

4.      Lebih cepat di dapatkan hasil karena dibantu dengan proses pemanasan.

5.      Hasil (volume) minyak atsiri dapat langsung diukur.

6.      Pelarut dapat ditambahkan sehingga mencegah habisnya pelarut               

Kerugian teknik destilasi stahl:

1.   Tidak semua bahan dapat dilakukan dengan teknik ini, terutama bahan yang mengandung fraksi sabun, bahan yang larut dalam air, bahan yang tidak panas (termolabil) dan bahan yang mudah hangus.

2.      Adanya air sering terjadi hidrolisa                

3. Waktu penyulingan lama.                                                                                                                                                                                                             

Cengkeh memiliki bau yang khas berasal dari minyak atsiri yang terdapat pada bunga (10-20%), tangkai (5-10%) dan daun (1-4%). Komponen terbesar yang terdapat dalam minyak atsiri cengkeh adalah eugenol sebesar 70-80%.

Metode destilasi stahl ini merupakan teknik penyulingan suatu campuran yang berwujud cairan yang tidak saling bercampur, hingga membentuk dua fasa atau dua lapisan. Proses ini dilakukan dengan bantuan air maupun uap air. Destilasi stahl termasuk dalam teknik hidrodestilasi dengan metode destilasi air. Hidrodestilasi memiliki 3 jenis metode berdasarkan cara penanganan bahan yang diproses yaitu : destilasi air, destilasi uap dan air serta destilasi uap langsung.

Cengkeh yang digunakan dalam percobaan ini 30 gram. Pada pemasangan alat distilasi diberi vaselin di setiap sambungannya agar tidak ada celah uap keluar, sehingga hasil distilasi yang didapat maksimal. Cengkeh dimasukkan ke dalam labu alas bulat dan ditambahkan air, kemudian diaduk. Penambahan air ditujukan sebagai pelarut. Penggunaan pelarut air dikarenakan lebih aman, lebih praktis dan ekonomis, serta memiliki titik didih yang lebih tinggi dari titik didih minyak atsiri cengkeh. Pemasan berlangsung selama satu jam.

Minyak atsiri yang berasal dari cengkeh akan menguap bersama air selama proses pemanasan. Uap tersebut kemudian melewati kondensor. Fungsi kondensor adalah sebagai pendingin uap, sehingga uap yang melewati kondensor akan berubah wujud menjadi cair kembali (mengembun). Proses pendinginan ini terjadi karena di dalam kondensor dialiri air, dimana air ini dilewatkan dari bagian bawah kemudian dibuang di bagian atas. Hal ini dimaksudkan jika air dimasukkan di bagian atas maka akan terjadi pertemuan suhu panas dari uap dengan suhu dingin dari air, sehingga berisiko alat akan pecah. Uap yang telah melewati kondensor dan mengalami perubahan fase menjadi cairan (biasa disebut destilat) akan ditampung pada erlenmayer.

Distilat yang diperoleh dari percobaan ini yaitu campuran air dan minyak, dimana terbentuk 2 fase. Bagian atas berwarna putih keruh, sedangkan bagian bawah berwarna kekuningan. Bagian atas tersebut mengindikasikan air, sedangkan bagian bawah minyak atsiri dari cengkeh. Hal ini sesuai  dengan massa jenis  eugenol (minyak atsiri cengkeh) lebih besar yaitu 1,0315 gram/ml sedangkan air 1,0 gram/ml sehingga dalam campuran minyak atsiri cengkeh akan berada di bagian bawah. Bau khas cengkeh juga dihasilkan dari destilat yang diperoleh.

Proses pemisahan minyak dan air ini menurut teori dilakukan dengan cara dekantasi distilat yang selanjutnya ditambahkan MgSO4 dengan tujuan mengikat sisa-sisa air sehingga diperoleh eugonol murni dan bulatan-bulatan kecil tadi membentuk bulatan besar. Namun pada percobaan ini, pemisahan minyak dan air dilakukan dengan menggunakan pipet tetes, dikarenakan hasil minyak atsiri yang diperoleh hanya sedikit.

Volume  minyak atsiri yang diperoleh adalah 1 ml, atau jika dikonversikan menjadi satuan gram adalah 0,85 gram, sehingga dapat dihitung rendemen minyak atsiri adalah 1,7 %. Menurut Nurdjannah (2004), hasil distilasi bunga cengkeh selama 9 jam menghasilkan rendemen 9,67% dengan kadar eugenol 71,56%, trans-karyofilen 11,63%, dan eugenol asetat 15,14%. Perbedaan rendemen ini  menunjukkan bahwa lama distilasi berpengaruh terhadap rendemen minyak cengkeh, selain itu perbedaan metode isolasi, jenis pelarut asal bunga cengkeh dan preparasi bunga cengkeh sebelum distilasi dapat mempengaruhi rendemen minyak cengkeh yang dihasilkan.

Setelah diperoleh hasil minyak cengkeh dilakukan proses pemisahan dengan cara Kromatgrafi Lapis Tipis (KLT). KLT adalah suatu metode pemisahan fitokimia dari campuran zat dengan menggunakan sebuah lapisan tipis bahan penjerap, karena penggunaan lapis tipis ini, maka prosesnya disebut Kromatografi Lapis Tipis. Prinsip KLT adalah pemisahan suatu zat berdasarkan perbedaan kepolaran. Pada proses KLT dugunakan dua jenis fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam atau bahan penjerap terdiri dari  bahan berbutir-butir yang di tempatkan pada penyangga berupa plat, gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Fase diam pada umumnya adalah silika gel, aluminium oksida, kiesel guhr, selulosa. Pada percobaan ini digunakan fase diam silika gel GF-254. Alasan pemilihannya karena mudah di dapat dan tidak berisiko terjadi kesalahan. Sedangkan fase gerak adalah media angkut yang terdiri dari suatu atau beberapa pelarut, bergerak di dalam fase diam karena adanya gaya kapiler. Pada percobaan ini digunakan fase gerak N-heksana : kloroform (3:2) dan digunakan sebnayak 10ml. Pemilihan fase gerak didasarkan pada sifat kelarutan dan memiliki polaritas yang berbeda karena daya elusi dapat disesuaikan sehingga berlaku untuk semua jenis senyawa yang terkandung dalam cuplikan. Sebenarnya N-heksan yang bersifat non-polar dapat menghambat aliran eugenol dan sifat kloroform dapat membawa senyawa lain yang dapat bercampur bersama-sama dengan eugenol terelusi atau naik keatas sehingga yang akan terdeteksi adalah eugenol.

            Persyaratan pelarut yang digunakan antara lain:

1.    Mempu menghasilkan pemisahan yang baik.

2.    Tidak merusak lapisan adsorben yang digunakan.

3.    Tidak bereaksi dengan senyawa yang dipisahkan.

4.    Cairan elusi biasanya berupa zat organik yang mudah menguap agar memudahkan pengerjaaan selanjutnya.

            Setelah fase gerak dibuat dilakukan penjenuhan dengan cara mencelupkan ujung kertas saring pada fase gerak dalam gelas beker dan ditutup, dibiarkan fase gerak merambat hingga ujung atas kertas saring. Tujuan dari penjenuhan ini adalah untuk mempercepat proses elusi. Penutupan gelas beker adalah untuk meyakinkan bahwa kondisi dalam gelas beker terjenuhkan oleh uap pelarut.Untuk mendapatkan kondisi ini dalam gelas beker ditempatkan kertas saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi jenuh dalam gelas beker dengan uap mencegah penguapan pelarut .

            Setelah fase gerak jenuh dilakukan proses KLT. Fase diam yaitu silika gel GF 254 ditotoli minyak atsiri cengkeh yang diperoleh. Kemudian dimasukan kedalam fase gerak.. Penotolan pada plat KLT dilakukan sedemikian rupa dan diusahakan diameter totolan sekecil mungkin agar tidak terjadi penyebaran noda-noda dan timbulnya noda ekor. Pencelupan plat KLT diusahakan tidak melebihi garis batas bawah, karena dapat mempengaruhi totolan sampel yang terelusi dan totolan yang dihasilkan tidak jelas saat di lihat di bawah lampu UV VIS.

          Deteksi noda dilakukan menggunakan lampu UV-254 nm dan UV-366 nm. Kemudian dihitung harga Rf. Nilai Rf yang diperoleh adalah 0,56.

Penghitungan nilai Rf  = Jarak yang ditempuh oleh noda /

                                          Jarak yang ditempuh pelarut

Besarnya Rf tergantung pada kepolaran suatu sampel. Semakin polar suatu sampel maka nilai Rf nya semakin kecil, karena sampel cenderung lebih berikatan dengan fase diam (plat) yang juga bersifat polar. Faktor-faktor yang mempengaruhi dalam gerakan noda dalam KLT juga mempengaruhi harga Rf :

1.      Struktur kimia yang bersenyawa yang sedang dipisahkan

2.      Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya

3.      Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap

4.      Pelarut fase gerak

5.      Kepolaran senyawa yang dipisahkan

6.      Derajat kejenuhan dari uap dalam bejana pengembangan yang digunakan teknik percobaan jumlah cuplikan yang digunakan

7.      Suhu

8.      Kesetimbangan

   F.     KESIMPULAN

Setelah dilakukan percobaan dapat disimpulkan bahwa :

·         Minyak atsiri yang diperoleh dari 50 gram cengkeh sebesar 1 ml

·         Analisa kualitatif dari cengkeh dengan menggunakan KLT didapat harga Rf sebesar 0,56

·         Destilasi stahl dapat digunakan untuk memisahkan minyak atsiri secara langsung

    G.    DAFTAR PUSTAKA

Ketaren,  1987,  Minyak  atsiri,  UI  Press,  Terjemahan  :  Guenther,  E.,  1947, Essential Oils, Vol.1, John Willey and Sons, New York, Hal : 21-25, 90, 132-134, 244-245.

Padmawinata, K.1991.  Pengantar Kromatografi,  Edisi ke-2,  ITB, Bandung, Terjemahan : Introduction to Chromatografi, Gritter, R.J., Bobbitt, J.M., and Schwarting, A.E., 1985, Holden Day Inc, USA, Hal : 109-175

Sastrohamidjojo,  H.,  2004,  Kimia  Minyak  Atsiri,  Gadjah  Mada  University  Press, Yogyakarta, Hal : 13-14

Sastrohamidjojo,  H.,  1991,   Spektroskopi,   Liberty,   Yogyakarta,   Hal  :  1-97, 163-184.

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA : ISOLASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI ATAU PIPERIS ALBI

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

PERCOBAAN I

ISOLASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI ATAU PIPERIS ALBI

Oleh :

Kelompok 1 :

1.      Abdurrahman Al Asy’ari (M3514001)

2.      Adilla Nurmita                 (M3514002)

3.      Agustina Nur Rohmah     (M3514003)

4.      Amalian Dian K               (M3514005)

5.      Ani Nur Hayati                (M3514007)

6.      Dewi Yulinawati              (M3514012)

7.      Dian Islami M                  (M3514013)

8.      Dina Istiana                      (M3514014)

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2015

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

PERCOBAAN I

ISOLASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI

A.    TUJUAN

·         Dapat memahami prinsip isolasi piperin dari fructus piperis nigri

·         Dapat melakukan isolasi piperin dari fructus piperis nigri

·         Dapat melakukan analisis kualitatif dengan metode KLT

B.     DASAR TEORI

Piperin termasuk golongan alkaloid yang merupakan senyawa amida basa lemah yang dapat membentuk garam dengan asam mineral kuat. Khasiat dari buah lada yaitu dapat mengobati kaki bengkak pada ibu hamil, kolera, nyeri haid, rematik, salesma, dan impoten (Septiatin,2001).

Teknik ekstraksi sangat berguna untuk memisahkan secara cepat dan bersih baik untuk zat organik maupun zat anorganik. Cara ini dapat digunakan untuk analisis mikro dan makro. Secara umum, ekstraksi adalah proses penarikan suatu zat terlarut dari larutannya di dalam air oleh suatu pelarut lain yang tidak dapat bercampur dengan air (Purwani, et al., 2008).

Metode yang digunakan untuk mengisolasi piperin dari lada hitam adalah ekstraksi soxhlet yang merupakan pemisahan satu atau beberapa bahan dari suatu padatan dengan menggunakan bantuan pelarut. Pemisahan terjadi atas dasar kemampuan larut yang berbeda dari komponen-komponen dalam campuran/pemilihan jenis pelarut ini didasarkan atas beberapa faktor, yaitu selektivitas, kelarutan, kemampuan tidak saling campur, reaktivitas, titik didih, dan kriteria lainnya (Bernasconi,1995).

KLT dapat digunakan untuk memisahkan berbagai senyawa seperti ion-ion anorganik kompleks, senyawa-senyawa organik dengan anorganik, dan senyawa organik baik yang terdapat di alam dan senyawa organik sintesis. Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis dibandingkan dengan kromatografi kertas ialah karena dapat dihasilkannya pemisahan yang lebih sempurna, kepekaan yang lebih tinggi dan dapat dilaksanakan dengan lebih cepat.(Voight, 1995).

Empat macam absorben yang umum dipakai ialah silika gel, alumina, kieselguhr, dan selulosa. Sempel yang merupakan campuran senyawa yang akan dipisahkan, dilarutkan dalam zat pelarut yang mudah menguap, misalnya kloroform atau zat pelarut lain yang serupa, yang mempunyai titik didih antara 50-100 C. Pemilihan sistem pelarut atas dasar like dissolve like berarti untuk memisahkan sampel yang bersifat non polar digunakan sistem pelarut yang bersifat non polar juga (Adnan, 1997).

Kriatalisasi langsung merupakan prosedur paling sederhana, tetapi jarang memberikan hasil yang memuaskan untuk pemisahan alkaloid murni, kecuali apabila satu alkaloid yang terdapat dalam bahan tidak larut. Beberapa kombinasi pelarut yang sering digunakan untuk kristalisasi alkaloid meliputi metanol, etanol berair, metanol-kloroform, metanol-eter, metanol-aseton, dan etanol-aseton (Sastrohamidjojo,1996).

  CARA KERJA

     D.    ALAT DAN BAHAN

·      Alat yang digunakan meliputi :

1.        Perangkat penyari soxhlet (volume 100 ml)           (1 set)

2.        Heating mantle                                                       (1 buah)

3.        Batang pengaduk                                                   (1 buah)

4.        Cawan porselen                                                      (2 buah)

5.        Corong                                                                    (1 buah)

6.        Perangkat KLT                                                       (1 set)

7.        Gelas ukur                                                              (1 buah)

8.        Penangas air                                                            (1 buah)

9.        Mortir dan stamfer                                                             (1 buah)

10.    Gelas beker                                                             (2 buah)

11.    Timbangan                                                              (1 buah)

                                          

·      Bahan yang digunakan meliputi :

1.        Piperis nigri                                                             (30 gram)

2.        Etanol 96%                                                             (150 ml)

3.        Air                                                                          (secukupnya)

4.        Vaselin                                                                    (secukupnya)

5.        KOH etanolik 10%                                                 (10 ml)

6.        Silica gel GF 254                                                    (1 buah)

7.        Diklormetan                                                            (7,5 ml)

8.        Etil asetat                                                                (2,5 ml)

9.        Anisaldehid- Asam sulfat                                       (secukupnya)

E. HASIL DAN PEMBAHASAN

·         Hasil Percobaan

Pada proses isolasi Piperin dari fructus Piperis nigri ini diperoleh 8 kali sirkulasi dengan data sebagai berikut :

Volume piperin yang diperoleh dari hasil isolasi         : 125 ml

Volume awal sebelum diuapkan                                 : 122 ml

Bobot setelah diuapkan                                               : 1,5 gram

Hasil KLT

            Jarak noda       : 3,4 cm

            Jarak pelarut    : 7 cm

·         Pembahasan

Praktikum kali ini adalah praktikum Isolasi Piperin dari Fructus Piperis Nigri. Pada praktikum kali ini bertujuan untuk mengisolasi piperin dari Piperis Nigri, menganalisa secara kualitatif hasil isolasi dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT), dan melakukan isolasi dengan metode sokhletasi.

Ada beberapa metode untuk mengisolasi suatu bahan atau sampel, namun pada parktikum kali ini isolasi piperin menggunakan metode sokhletasi.  Metode sokhletasi adalah salah satu metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus soxklet sehingga terjadi ekstraksi konstan dengan adanya pendingin balik. Digunakan metode sokhletasi dikarenakan pelarut yang digunakan lebih sedikit dan larutan sari yang dialirkan melalui pipa sifon tetapi tinggal dalam labu, sehingga pelarut yang digunakan untuk mengekstrak sampel selalu baru dan meningkatkan laju ekstraksi, waktu yang digunakan pun lebih cepat. Namun, metode sokhletasi juga memiliki kekurangan yaitu pelarut yang digunakan harus mudah menguap dan tidak cocok digunakan untuk senyawa yang tidak tahan pemanasan.

Prinsip dari isolasi dengan metode sokhletasi adalah piperin disari dari buah piper dengan menggunakan etanol 96%, kemudian dipisahkan dari senyawa resin dengan penambahan KOH-etanol 10% b/v. Kristalisasi dilakukan dengan menggunakan etanol.

Piperin merupakan senyawa amida basa lemah yang dapa tmembentuk garam dengan asam mineral kuat. Apabila dihidrolisis dengan KOH-etanolik akan menghasilkan kalium piperinat dan piperin.

Proses isolasi ini dilakukan dengan cara menimbang 30 gram serbuk mrica dan dibungkus dengan menggunakan kertas saring yang ditali dengan menggunakan tali kenur pada bagian ujung-ujungnya, sehingga berbentuk seperti permen. Hal ini dilakukan agar serbuk merica mudah diambil saat proses isolasi selesai dan sampel tidak bercampur langsung dengan pelarut yang digunakan. Digunakan kertas saring dikarenakan kertas saring mempunyai dinding yang tipis dan berpori yang dapat mempermudah pelarut untuk menyerap piperin yang terkandung didalam sampel. Kemudian serbuk merica yang sudah ditali dimasukkan kedalam alat penyari sokhletasi yang disebut pipa timbel dan ditambahkan etanol 96% sebanyak150  ml atausampai 2 kali sirkulasi. Pada labu alas bulat dimasukkan 3 buah batu didih yang tujuannya agar panas didalam labu alas bulat bisa merata dan stabil, serta tidak menyebabkan labu alas bulat pecah saat pelarut mendidih. Labu alas bulat diletakkan di atas heating mantle namun jangan terlalu dekat, agar saat pelarut mendidih dan suhunya panas tidak menyebabkan labu alas bulat gosong. Kemudian alat dirangkai, bagian atas alat soxhlet disambungkan dengan selang untuk air keluar sedangkan bagian bawah alatsoxhlet dipasangkan selang yang dihubungkan dengan water pump untuk air masuk. Setelah semua alat dirangkai, water pump dan heating mantle dihubungkan ke arus listrik untuk memulai proses isolasi.

Proses penyarian dilakukan sebanyak 8 kali sirkulasi. Yang dimaksud dengan 1 kali sirkulasi adalah saat dimana pelarut naik dan kemudian kembali kebawah. Semakin lama waktu penyarian maka sirkulasi yang terjadi akan semakin cepat. Hal ini dikarekan pelarut sudah mulai panas sehingga lebih mudah menguap dan naik keatas. Dari isolasi ini diperoleh sari sebanyak 125 ml dan diambil 3 ml untuk dimasukkan ke dalam flacon. Sisa sari tersebut kemudian diuapkan.

Sisa sari yang diperoleh dimasukkan ke dalam cawan porselin kemuadian diuapkan di atas waterbath. Untuk menguapkan sari sampai diperoleh ekstrak kental  dibutuhkan waktu sangat lama, sehingga penguapan dilakukan pada hari lain. Ekstrak kental yang diperoleh ditambahkan dengan KOH-etanolik sebanyak 10 ml. Penambahan KOH-etanolik tidak boleh berlebihan dan harus dalam kondisi dingin karena piperin bila dihidrolisis dengan KOH-etanolik akan menghasilkan kalium piperinat dan piperin. Kemudian, ekstrak tersebut diaduk dan di diamkan sampai terbentuk endapan. Setelah terbentuk endapan, disaring dengan menggunakan kertas saring dan sari jernih yang diperoleh didinginkan pada lemari es.Pada saat sari jernih tersebut didinginkan pada lemaries, akan membentuk kristal. Kristal yang dihasilkan seberat 1,5 gram, sehingga rendemen hasilnya adalah 5%. Rendemen inidiperoleh dari bobot akhir dibagi dengan bobot awal dan dikalikan 100%. Pengamatan organoleptik terhadap kristal yang didapat adalah kristal berbau menyengat khas piperin dengan warna coklat kekuningan.

Metode pemisahan yang terakhir adalah Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Kromatografi lapis tipis merupakan teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam media berupa lempengan kromatografi. Pada KLT, komponen –  komponen dari suatu senyawa akan dipisahkan antar dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Fase diam akan menahan komponen campuran senyawa sedangkan fase geraknya akan melarutkan zat dalam komponen. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal, sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat.

Ada beberapa tahap yang dilakukanpada proses KLT yaitu penyiapan plat, pemilihan fase gerak, fase diam, serta pengamatan lokasi bercak pada kromatogram, deteksi dan identifikasi. Dalam praktikum KLT ini fase gerak yang digunakan adalah pelarut campuran dari diklormetan : etilasetat (75:25v/v). Dalam praktikum ini fase geraknya dibuat setengah dari jumlah total. Selanjutnya adalah preparasi fase diamnya yaitu berupa silica Gel GF 254, dilakukan dengan memotong plat dengan ukuran 5 x 10 cm. Pemotongan dilakukan menggunakan cutter supaya plat tidak rusak dan garis potongan tepi plat lebih akurat dan tidak mengganggu proses elusi.

Proses selanjutnya plat diberikan tanda batas atas dan tanda batas  bawah masing-masing 1cm,sebagai batas tempat penotolan sampel yaitu pada tanda batas bawah dansebagai penandaakhir proses pengelusian yaitu tanda batas atas. Jarak antarfraksi yaitu 1,5 cm dan jarak tepi dari fraksi yaitu 1 cm. Setelah itu fase gerak dijenuhkan, penjenuhan dilakukan supaya tekanan uap eluen dalam chamber dapat merata sehingga pengelusian dapat seragam kecepatannya dan penjenuhan dilakukan untuk mengoptimalkan proses pengembangan fase gerak. Sambil menunggu chamber jenuh, kita melakukan penotolan sampel pada plat KLT. Sampel ditotolkan dengan menggunakan pipa kapiler dan dilakukan sekali penotolan.

Plat yang sudah di totol dengan sampel tadi dimasukkan ke dalam chamber yang selesai dijenuhkan. Pengembangan dilakukan dengan memasukkan plat KLT yang telah ditotolkan ke dalam chamber. Plat selanjutnya di elusi sampai tanda batas atas pengembangan yang telah dibuat tadi.Cara pengembangan yang digunakan pada praktikum ini adalah ascending (menaik), yaitu pengembangan berdasarkan pada daya kapilernya.Tepi bagian bawah plat yang telah ditotoli sampel dimasukkan dan dicelupkan ke dalam fase gerak kurang lebih 0,5-1 cm. Dimana tinggi fase gerak dalam chamber harus dibawah plat yang berisi totolan sampel dan volume fase gerak dibuat sedikit mungkin tapitetap dapat mengelusi lempeng sampai pada batas jarak pengembangan. Hal tersebut bertujuan supaya tidak terjadi kontaminasi selama proses elusi berlangsung dan sampel tidak terendam yang kemudian bias merembet apabila tinggi fase gerak lebih tinggi dari sampel. Setelah proses elusi selesai, lalu plat dikeluarkan dari dalam chamber dan diangin- anginkan selama 10 menit. Setelah itu spot yang berjalanta dilihat di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm. Kemudian bercak atau elusi yang terbentuk di semprot dengan pereaksi semprotnya ,hal ini dilakukan dengan tujuan untuk memperjelas atau mempertegas adanya kandungan senyawa kimia dalam ekstrak.

Berdasarkan hasil yang telah diperoleh dari pengamatan, ketika dilihat di bawah sinar UV254 dan 366 nm didapatkan jarak noda 3,4 cm dan jarak pelarutnya 7 cm dengan harga Rf 0,49. Harga rf yang diperoleh hamper mendekati harga rf standart yaitu 0,5.Jadi, dapat disimpulkan bahwa spot yang dihasilkan pada identifikasi KLT itu adalah senyawa piperin.

F.      Kesimpulan

- Prinsip dari isolasi dengan metode sokhletasi adalah piperin disari dari buah piper dengan menggunakan etanol 96%, kemudian dipisahkan dari senyawa resin dengan penambahan KOH-etanol 10% b/v

- 1 kali sirkulasi adalah saat dimana pelarut naik dan kemudian kembali kebawah

- Piperin bila dihidrolisis dengan KOH-etanolik akan menghasilkan kalium piperinat dan piperin.

- Kromatografi lapis tipis merupakan teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam media berupa lempengan kromatografi

-  Harga Rf yang diperoleh 0,49. Harga rf tersebut hampir mendekati harga rf standart yaitu 0,5. Sehingga spot yang dihasilkan pada identifikasi KLT tersebut adalah senyawa piperin

G.  Daftar Pustaka

Adnan, Muhammad. 1997. Teknik Kromatografi. Andi offset: Yogyakarta.

Bernasconi. 1995. Teknik Kimia II. Pradya Paramitha: Jakarta.

Purwani, et al, 2007. Ekstraksi Neodenium memakai Asam 01-2 etil heksil fosfat. Vol 1 (1):3

Sastrohamidjojo, hardjono. 1996. Sumber Bahan Alam. UGM Press: Yogyakarta.

Septiatin, Eatin. 2008. Apotek Hidup dari Rempah-rempah. Tanaman Hias, dan Tanaman Liar, CV. YRAMA WIDYA: Bandung.

Voight, R. 1995. Buku Pelajaran teknologi Farmasi Edisi V. UGM Press: Yogyakarta.